川芎嗪抗癫痫的免疫学机制

　　川芎嗪（ligustrazine）为中药川芎的有效成分，化学结构为四甲基吡嗪（tetramethylpyrazine， TMP），进入机体后，能有效透过血脑屏障，广泛分布在脑干、海马、纹状体、小脑和大脑皮层等部位。TMP扩张血管的机制已有许多研究〔1〕，但对癫痫的作用及机制研究较少。本研究探讨川芎嗪是否通过降低白细胞介素（IL）2、IL6和肿瘤坏死因子α（TNFα）表达水平来影响神经系统的兴奋性，为川芎嗪治疗癫痫提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 药品及试剂

　　川芎嗪注射液40 mg/2 ml ，TNFα、IL2和IL6酶联免疫检测试剂盒（美国R&D公司生产）

　　1.2 动物分组及模型制备

　　采用健康雄性Wistar大鼠40只（体重200～250 g。随机分4组，每组10只。正常对照组：腹腔注射0.9%氯化钠注射液2 ml;癫痫模型组：4 mg/kg腹腔注射戊四氮;致痫前给予川芎嗪组：40 mg/ kg腹腔注射川芎嗪〔2〕，30 min后，4 mg/kg腹腔注射戊四氮;致痫后给予川芎嗪组：4 mg/kg腹腔注射戊四氮，45 min后，40 mg/kg腹腔注射川芎嗪。

　　1.3 行为学表现

　　根据Diehl〔3〕的评估标准，将大鼠的癫痫发作程度分为0～Ⅴ级。0级：无任何反应;I级：面部抽搐及咀嚼;Ⅱ级：点头或甩尾;Ⅲ级：一个肢体抽动;Ⅳ级：多个肢体抽动或强直;Ⅴ级：前肢及全身阵挛，失去平衡，跌倒。

　　1.4 放射免疫法测定血清中TNFα、IL2和IL6的含量

　　大鼠颈静脉取2 ml血液，离心沉淀，-20℃保存。测定前置室温复融，混匀，4℃ 3 000 r/min离心5 min，取上清液按试剂盒说明书方法测定。

　　1.5 统计学处理

　　所有实验数据均用x±s表示，采用SPSS 11.0统计软件进行方差分析和t检验。

　　2 结果

　　2.1 行为学观察

　　潜伏期是从注入戊四氮开始到出现Ⅰ级发作时间，持续时间是指从出现Ⅰ级发作到不再发作的时间，见表1。在4组大鼠中，对照组无癫痫发作，癫痫组大鼠多为Ⅲ～Ⅴ级发作;致痫前给予川芎嗪组大鼠多为Ⅰ～Ⅲ级发作;致痫后给予川芎嗪组大鼠多为Ⅲ～Ⅴ级发作。表1 各组大鼠癫痫发作潜伏期和持续时间比较（略）

　　2.2 TNFα、IL2、IL6和IL8的放射免疫检测 实验组血清中TNFα、IL2和IL6含量均明显高于正常对照组（均P<0.01），见表2。表2 4组血清中TNFα、IL2和IL6的含量（略）

　　3 讨论

　　目前认为癫痫的发病过程与神经免疫调节网络失衡密切相关。在这个调节网络中，神经系统调节免疫系统的功能主要通过产生多种神经肽和神经递质，而免疫系统调节神经系统的功能主要是通过产生免疫细胞因子（cytokine，CK）〔4〕。

　　NMDA（N甲基D天门冬氨酸）受体是一种兴奋性神经递质的主要受体，细胞内Ca2+浓度升高或NMDA受体活性升高或数量增加，是神经兴奋性增高的一个重要标志，同时也是癫痫发病的重要基础〔2〕。IL2是由活化的T细胞产生的重要细胞因子，该因子能够促进大脑皮层神经元细胞钙内流、升高细胞内游离Ca2+浓度和上调神经元NMDA受体数量，起到兴奋性神经递质的作用〔5〕。

　　Glu（谷氨酸）是一种中枢神经系统内含量zui高的兴奋性神经递质。Glu作用于细胞膜上NMDA受体，使受体依赖性Ca2+通道开放，Ca2+内流，细胞内Ca2+增加可以激活磷脂酶，使质膜内的磷脂酰肌醇（PIP2）水解，产生胞内第二信使甘油二酯（DAG）和三磷酸肌醇（IP3），增加胞内Ca2+库释放〔6〕。TNFα与炎症和肿瘤关系密切，由巨噬细胞和淋巴细胞分泌，是具有广泛生物学效应的细胞因子，可刺激星形胶质细胞和小胶质细胞分泌Glu，抑制星形胶质细胞对Glu摄取，上调 Glu的NMDA受体的活性，通过改变Glu含量影响癫痫发作过程。

　　IL6主要由单核巨噬细胞、T淋巴细胞分泌，也可由中枢神经细胞产生，在大鼠海马区原位杂交技术检出IL6，提示某些中枢神经元或者胶质细胞具有合成IL6的能力〔7〕，但其表达水平一般较低。某些病理过程导致的IL6过量表达导致海马和小脑部位的星形胶质细胞明显增生，引起海马区脑电图癫痫样改变，并出现癫痫发作征候〔8〕。

　　本实验结果显示，与癫痫组相比，致痫前给予川芎嗪的大鼠，癫痫发作潜伏期延长和持续时间缩短，差异显著（P<0.01）;致痫前给予川芎嗪组IL2、IL6和TNFα水平明显低于癫痫模型组，说明川芎嗪通过降低IL2、IL6和TNFα含量从而影响其对中枢神经系统免疫反应的调节，维持免疫神经网络的平衡，控制癫痫发作。与癫痫组相比，致痫后给予川芎嗪大鼠，各项指标无显著差异（P>0.05），分析原因可能由于在癫痫发作45 min后才给予川芎嗪治疗，时间较长，错过了其抗癫痫作用的*时间。

　　川芎嗪临床应用范围广，无明显副作用，价格便宜，货源充分，作为非镇静类抗癫痫药物的开发，具有可喜的前景，值得在今后的科研实践中进一步深入研究。