劲马生物|ELISA实验中不同类型样本的处理方法

　　ELISA实验中正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步，下面就和大家简单介绍在ELISA实验中对不同类型样本的处理方法！
 

　　1、 血清
 

　　血清是常用于ELISA检测的一类样本，处理比较简单。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃一晚上，使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清大程度的析出)。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
 

　　采血过程中应避免溶血，因红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，从而导致检测的不准确性，同时也应避免细菌污染，因菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
 

　　2、 血浆
 

　　ELISA实验用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃1000×g离心15min，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融，避免使用溶血或高血脂的标本。
 

　　3、 细胞培养上清
 

　　取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。)
 

　　4、 细胞裂解液
 

　　(1)吸去培养板内的培养基，用yi酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。(悬浮细胞可省略)
 

　　(2)收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
 

　　(3)加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
 

　　(4)将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。
 

　　(5)4℃10000×g离心10min，除去细胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。)
 

　　5、组织匀浆液
 

　　(1)将组织样本用PBS 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。
 

　　(2)将组织块称重，记录后剪碎，碎块小，便于匀浆得充分。
 

　　(3)将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。(具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)
 

　　(4)吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g 离心5-10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
 

　　6、 尿液、唾液等其他液体生物样本
 

　　1000×g离心20min，取上清即可检测。
 

　　小结：
 

　　ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，故应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。为保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本尽量在1~6个月内进行检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。(保证样本不含NaN3，NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。)