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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的优缺点

更新时间:2013-06-28 浏览次数:12641

  考马斯亮蓝法测蛋白质含量的优点是:
  
  (1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其zui低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
  
  (2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性。因而*不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
  
  (3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K、Na、Mg2离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
  
  考马斯亮蓝法测蛋白质含量的缺点是:
  
  (1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。
  
  (2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、TritonX-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH。(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样)。
  
  (3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。

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