elisa实验过程中影响的因素

我司派遣资深技术为您解答Elisa实验过程中影响的因素有哪些。

首先需要关键一步选择试剂：  
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。  
参考准备ELISA实验的正确步骤#ELISA实验的事前准备工作一  
标本收集与保存：  
避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本；  
2-8℃下，标本可放置24-48小时，长期保存需放置-20℃下。  
请避免反复冻融。  
具体请参照：  
ELISA实验标本的采集与处理：  
ELISA实验标本的保存：  
试剂使用中的准备工作及注意事项：  
试剂盒中会有提示，一般需要准备的有：  
洗涤液；用前配制；有的试剂盒会标明，配好的4度下一般可以放一个月；如果没有标明，尽量用新鲜的，不要多配制。  
显色液（有A液和B液的），用前15分钟配制；  
标准品：有的试剂盒中标准品是已经配制好的，4度保存；有的是要现配制的；按照说明书操作；  
浓缩生物素结合的二抗和HRP：如果需要配制，试剂盒没注明配好可以保存多久的话，尽量现配现用（用前15分钟配制）；  
原则是：  
试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话，应该现配现用；不要怕麻烦；  
还有，小瓶的管子开盖前要离心，以免盖子上粘连以後总量不够。  
加 样： 
室温温育的试剂，特别是温育时间比较短的实验操作的试剂，加样对数据的影响比较大。特别要注意加样问题。  
不好的操作原因：  
不会正确使用加样器；  
血清或血浆标本分离不好即进行加样；  
手工操作中，加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；  
加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外；  

解决办法：  
熟悉加样器的使用，在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确；  
试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清後再检测；  
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；  
加样後及时放入孵箱；  
加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；  
如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他後处理仪器加酶试剂；  
标本较多时，请分批操作。每次加样在两到三分钟内完成。加标本时三排一加。每次加完样进行计时；  
参考ELISA#加样  
温 育：  
不好的操作原因：  
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；  
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。  
解决办法：  
贴封片或加盖：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜复盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。  
按说明步骤严格控制操作时间。  
建议采用空气浴进行温育。  
参考ELISA实验操作中的温育（incubation）  
洗 板：  
结果不好的可能原因  
采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。  
采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。  
反应板过多造成洗板等待时间长。  
在间接法中如本底较高。  

在ELISA 操作中，洗涤是zui主要的关键技术，操作时尤为注意：  
保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後在吸水纸或毛巾（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。）；  
注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释，应按要求稀释，所用的水电导率在1.5us/cm 之下，洗液如果结晶应待其融解後配制。  
保证洗板浸泡时间为40 秒左右，孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。  
合理安排，或多用几台洗板机。  
在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。  
参考ELISA#洗涤  
显 色：  
结果不好的可能原因  
显色剂配制後放置时间过长或使用过期显色剂；  
加显色剂时溅出孔外造成液体回流。  
解决方法：  
显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；  
加样时保持显色剂不外流，且加样量要准确，顺序不能颠倒。  
A、B液应避免接触金属器械。  
可以参考ELISA#显色和比色  
终 止：  
结果不好的可能原因：  
加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。  

解决方法：  
加终止液时应避免产生气泡，及时终止显色。  
读 板：  
结果不好的可能原因：  
读板时板底底部不透明、带水滴、有划痕及不规则的表面。  
应保证酶标板清洁。  
此外酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15~30℃，使用前先预热仪器15-30 分钟，测读结果更稳定。  
全过程：  
整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;  
实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。  
严谨的设计，的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证ELISA必要条件。在实际操作中必须严格遵照规定操作，以严谨的作风检测每一份标本，才能保证试验效果。 
关于产品售后服务问题：
1.有质量问题免费包换，合同上注明了的.(质量问题包括运输不当，客户在使用过程中测不出结果，等等！)
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