幽门螺杆菌抗体采用Elisa法检测结果

 根据上海劲马生物对市场研究进行调查。很多研究者正进一步探索幽门螺杆菌抗体其致病机理，并从不同角度寻找快速、可靠的检测方法。除尿素呼吸试验外其余方法均需通过胃镜检查才能完成，鉴于取材难题，进一步寻找检测Hp感染的免疫学方不进非常必要的。今日技术主题劲马报道建立一种检测人体抗Hp抗体的ELISA试剂盒的实验结果及与细菌培养法和尿素酶测定法对比检测结果，研究证实本法特异、敏感、合用于大量标本普查和及时判定治疗反应。国外有人用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测临床病人血清中有Hp抗体报道，海内尚未有这方面研究讲演。

    斑点反应板上的固相胃幽门螺杆菌混合抗原与血清中的幽门螺杆菌抗体形成复合物，胶体金标记抗人IgG抗体再与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑点。

上海劲马分析具体测定方法：抗原包被微量滴定板：用包被液将抗原按2×108亿/ml（含蛋白8.6μg）稀释后，每孔加100μ，离心篮离心20min2000r/min后，倒去孔内液体，然后加入0.25％戊二醛液50μl/孔，4℃固定30min，倒去戊二醛，用洗涤液洗3次（每次3min），加5％小牛血清液，200ml/孔，经37℃30min封板后倒去孔内液体。每孔加待检血清(1：100稀释)100ml，37℃保温1h后，如上洗涤3次，同时做阴性对照孔和空白孔。之后于各孔内加和新鲜稀释的酶标羊抗人IgG结合物100ml，37℃保温半小时，于各孔中加入2NH2SO450μl终止反应后，于酶联测定仪以波长490nm测定OD值，将测得标本OD值（P）与阴性对照OD值（N）比（P/N），若P/N比大于或等于2.0为阳性。

    结果：结果显示阳性血清稀释度与OD值呈较好的线性关系，当血清稀释度为1：50时OD值为1.521，1：100时OD值是1.172，P/N比值均大于2.0，故以后实验中*抗体的血清浓度均用1：100的稀释度。为了验证ELISA试剂盒间接法用于检测Hp抗体的特异性，进行特异性吸收试验。选用8份Hp感染性血清以1：50稀释，加等量Hp菌悬液，混匀置37℃半小时，再置4℃过夜吸收后离心取上清液按上述实验前提和方法进行ELISA测定。为了确定用ELISA测定病人抗Hp抗体的阳性血清浓度，用Hp抗原8.6μg包板，SAHIgG—HRP仍用二个单位（1：256000），将二份阳性血清混后后稀释成1：50，1：100，1：200，1：400和1：800五种浓度进行ELISA试验，测定OD值的结果。

    自ELISA试剂盒法建立以来，证实具有敏感性高，不乱性强等长处，国外报道已有人用此法来检测人血清中抗Hp抗体，也证明特异、敏感。但因为这些方法操纵繁锁，或敏感性低，或可靠性欠佳，故现已较少采用。但ELISA－HpAb法与HpC和HpUT法检出的阳性病例数与胃镜检查的诊断和病理诊断是否*相符，有待进一步的研究和分析。但常规培养法需时3d～7d，HpUT法较快速，但受活检粘膜内菌量多少及取材部位影响较大，短暂停留在胃内的肠道菌易造成假阳性结果。关于诊断Hp病的血清学方法，至目前为止主要有补体结合试验，被动血凝集试验，细菌凝集试验等法。