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骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA原理

更新时间:2015-12-18 浏览次数:1549

大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)酶联免疫分析

 

 

试剂盒使用说明书

 

 

本试剂盒仅供研究使用。

 

 

检测范围:                                                                                                                     96T

 

1.2 ng/L – 45ng/L

使用目的:

本试剂盒用于测定大鼠细胞上清液样本中骨成型蛋白 2(BMP-2)含量。 实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨成型蛋白 2(BMP-2)平。用纯化的大鼠

骨成型蛋白 2(BMP-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入骨成 型蛋白 2(BMP-2)HRP 标记的骨成型蛋白 2(BMP-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗 体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在 酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨成型蛋白 2(BMP-2)呈正相关。用 酶标仪在  450nm  波长下测定吸光度(OD  通过标准曲线计算样品中大鼠骨成型蛋白

2(BMP-2)浓度。

试剂盒组成

 

 

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 制辣根过氧化物酶的(HRP活性。

操作步骤

1.    标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

 

 

 

 

2.    加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl测样品孔中先加样品稀释液 40µl

 

然后再加待测样品 10µl样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.    温育:用封板膜封板后置 37育 30 钟。

4.    配液:将 30 浓缩洗涤液用蒸馏水 30 稀释后备用

5.    洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.    加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.    温育:操作同 3

8.    洗涤:操作同 5

9.    显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37避光显色

10 .

10.  终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.  测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 。 测定应在加终止 液后 15 钟以内进行。

操作程序总结:

 

 

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样OD 由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

 

即为样品的实际浓度。 注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔*孔的 OD 先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6 个月

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