睾酮（T）竞争elisa试剂盒操作说明书

睾酮(T)酶联免疫吸附测定试剂盒

声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测血清、血浆或其 它相关生物液体中天然和重组 T 浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！

试剂盒组成：

特别说明：

#标准品一套的浓度分别为0 ng/mL，0.1ng/mL，0.4ng/mL，1.6ng/mL， 5ng/mL，20ng/mL。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！

检测原理: 本试剂盒采用竞争ELISA法。首先用羊抗兔包被微孔板，制成固相二抗，然后加入待测样本、辣 根过氧化物酶标记的睾酮以及抗睾酮抗体，使之形成包被二抗-抗睾酮抗体-睾酮（HRP）复合物， 标记睾酮的结合量与样品中的睾酮量成反比。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催 化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，T浓度与OD450值之间 呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中T的浓度。

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1.    加样：将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个标准点各设两 孔，每孔加入相应标准品 50μL；其余每个检测孔直接加待测样本 50μL。

2.    加完后，立即每孔加入 HRP 酶标记的睾酮抗原 50μL（空白对照孔除外），再按同样的顺序 每孔加入检测抗体 50μL，充分混匀，贴上覆膜，置 37℃温育 1 小时。注意不要有气泡，加

样时将样品加于酶标板底部，不要触及孔壁，轻轻晃动混匀。为保证实验结果有效性，每次 实验请重新做标准曲线。

3.    弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 10 秒，大约 350μL /每孔，甩干并在吸水纸上轻 拍将孔内液体拍干。

4.    每孔加底物溶液 A 液 50μL，底物溶液 B 液 50μL，振荡混匀后，置 37℃避光显色 15 分钟。

（根据实际显se情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即 可终止）。

5.    每孔加反应终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 溶液的加入顺序相同。

6.    立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪 器，设置好检测程序。

7.    实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。

结果判断:

1.    以标准品的浓度为横坐标，减去空白OD的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。如有设置复孔， 则应取其平均值计算。

2.    推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，

由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将减去空白OD值的样品的OD值代入标准 曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3.    若样品浓度高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

灵敏度、检测范围、特异性和重复性:

●灵敏度：zui小可测 0.05ng/mL。

●检测范围：0.1–20ng/mL。

●  特异性：与孕酮，雌二醇、DHT 无交叉反应。

●  重复性：板内，板间变异系数均<15%。