CK8检测细胞增殖/毒性的注意事项和常见问题归纳

   一年一度的高考来了，无论您家今年有没有考生，我们都清楚的知道高考对于学子们的重要意义！上海劲马在此祝愿学子们在高考中旗开得胜！一鸣惊人！金榜题名！今天劲马小编将带您了解CK8检测细胞增殖/毒性的注意事项和常见问题归纳！让您关注高考与掌握试剂常见问题两不误！
注意事项：
1.酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
3.当在培养箱内培养时，培养板zui外一圈的孔zui容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，zui外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
4.在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。
5.金属对CCK8显色有影响：当终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话，将会100%抑制。
6.悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。

常见问题归纳：
1：CCK的保存和稳定性如何？
答：CCK稳定性高，避光条件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存，避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。
2：CCK的细胞毒性如何？
答：CCK毒性非常低，因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或DNA荧光染色法。
3：CCK会对活细胞进行染色吗？
答：不会，首先WST-8不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可清除外源组分。
4：做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？
答：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的zui小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。
5：在加入CCK-8时可否不更换培养基？
答：一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。
6：若是使用6孔或者24孔板进行试验，CCK试剂使用量怎么样呢？
答：如果要使用6孔板或24孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
7：能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢？
答：可以，CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后加入培养基总体积的20%即可，这样可减少误差。
8：只可以在450 nm波长处测OD值吗？
答：可以在450 nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。
9：若是暂不检测OD值，该如何处理？
答：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化
10：在实验中OD值太高，怎么解决？
答：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外，可适当减少细胞的数量。
11：如果OD值太低，怎么解决？
答：可以采取2个办法：1、适当增加细胞数量 2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。
12：应该每次做标准曲线吗？
答：建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。

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