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CK8检测细胞增殖/毒性的注意事项和常见问题归纳


发布日期:[2018-06-06] 共阅[703]次

   一年一度的高考来了,无论您家今年有没有考生,我们都清楚的知道高考对于学子们的重要意义!上海劲马在此祝愿学子们在高考中旗开得胜!一鸣惊人!金榜题名!今天劲马小编将带您了解CK8检测细胞增殖/毒性的注意事项和常见问题归纳!让您关注高考与掌握试剂常见问题两不误!
注意事项:
1.酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰,可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染,以免影响结果。
3.当在培养箱内培养时,培养板zui外一圈的孔zui容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,zui外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。
4.在培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时,还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。
5.金属对CCK8显色有影响:当终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话,将会100%抑制。
6.悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。

常见问题归纳:
1:CCK的保存和稳定性如何?
答:CCK稳定性高,避光条件-20℃有效期2年,4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存,避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色,若颜色发生明显偏差,质量可能有发生变化。
2:CCK的细胞毒性如何?
答:CCK毒性非常低,因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法,中性红染色法或DNA荧光染色法。
3:CCK会对活细胞进行染色吗?
答:不会,首先WST-8不会进入细胞染色,整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分,反应结束更换新的培养液,即可清除外源组分。
4:做细胞活性检测时,每孔应该接种多少个细胞?
答:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的zui小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。
5:在加入CCK-8时可否不更换培养基?
答:一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话,有可能会产生误差,必须更换其它培养基。
6:若是使用6孔或者24孔板进行试验,CCK试剂使用量怎么样呢?
答:如果要使用6孔板或24孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
7:能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢?
答:可以,CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍,然后加入培养基总体积的20%即可,这样可减少误差。
8:只可以在450 nm波长处测OD值吗?
答:可以在450 nm波长处测OD值,但是若无此波长的滤光片,可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。
9:若是暂不检测OD值,该如何处理?
答:若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化
10:在实验中OD值太高,怎么解决?
答:可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外,可适当减少细胞的数量。
11:如果OD值太低,怎么解决?
答:可以采取2个办法:1、适当增加细胞数量 2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。
12:应该每次做标准曲线吗?
答:建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。

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