ELISA实验方法之捕获包被法检测抗体

    前面给大家介绍的ELISA实验几大常见方法，不知道您掌握多少了呢？如果没有掌握那也没有关系，可以去浏览之前发布的文章哦！我司提供技术在线指导，如您有技术问题，也可前来咨询我司技术人员！今天是常见方法的zui后一篇了，主要解析的是捕获包被法检测抗体和捕获包被法检测抗体，具体内容请往下看！

    捕获包被法检测抗体

    捕获包被法（亦称反向间接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。以目前常用的IgM测定为例，因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在，则后者可干扰IgM的测定。因此先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。

    捕获法测抗体的简要操作步骤：
    1）特异性捕获抗体的包被，先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体表面；
    2）加入待测样品，通过固定在载体表面的针对该抗原的抗体固定于载体表面；
    3）加入特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体；
    4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。

    捕获包被法检测抗体

    近年在亲和素-生物素系统上又发展出ABS-ELISA法 。亲和素是一种糖蛋白，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成，生物素为小分子化合物。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶形成生物素标记产物，标记方法颇为简便，并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素系统，简称ABS（avidin-biotin system）。由于亲和素与生物素间的亲和力*，结合迅速，且极其稳定，使BAS标记技术比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技术有着更高的灵敏度，为微量抗原、抗体的检测开辟了新的途径，大大提高了检测的灵敏度，但该方法比普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，因此在临床检验中ABS-ELISA应用不多。ABS-ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。

    在LAB法中，将特异性抗体生物素化、酶分子标记在亲和素分子上，生物素化抗体与被检抗原结合后，再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上，经酶促反应即可检出抗原，因此提高检测的敏感度。

    ABC法同样将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上，亲和素和酶标生物素需要先按一定比例形成ABC复合物，这种网络结构结合了大量的酶分子，当亲和素尚未被酶标生物素饱和时，生物素化抗体即可与之结合, 使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

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