ELISA实验常见三大问题原因解析（2019年全）

    ELISA实验常见的几大结果问题有标准曲线较差、无信号、变异系数（CV）较大等，那么实质导致的原因呢有多方面，具体的情况如下：

​标准曲线较差

原因一：标准品溶液配置有误
解决方案：确认是否进行正确稀释。

原因二：标准品复溶不当
解决方案：开盖前进行离心；检查复溶后是否存在不溶物。

原因三：标准品已降解
解决方案：按推荐方式保存和处理标准品。

原因四：曲线的标度不适合
解决方案：尝试使用不同标度绘制曲线，例如双对数、5 参数拟合。

原因五：移液器加样误差
解决方案：正确使用经过校准的移液器

无信号

原因一：孵育时间过短
解决方案：样品在 4 ℃ 孵育过夜，或遵循试剂的实验方案。

原因二：靶标含量低于检测范围
解决方案：减小样品的稀释倍数或浓缩样品。

原因三：样品类型不适用
解决方案：对于没有验证过的样品类型，检测信号可能减弱或没有使用验证过的样品类型作为阳性对照同时进行检测。

原因四：抗原表位被孔板吸附，无法识别
解决方案：使用直接或间接 ELISA 方法增强检测肽的能力，将肽偶联到大的载体蛋白上，然后包被到微量滴定板。

原因五：检测缓冲液的相容性
解决方案：确保检测缓冲液与靶标兼容（例如，保留酶活性、保留蛋白质相互作用）。

原因六：检测试剂不足
解决方案：遵循试剂的实验方案，增加检测试剂的浓度或用量。

原因七：样品制备不正确
解决方案：确保进行正确的样品制备/稀释。样品可能与微量滴定板测定形式不兼容。

原因七：抗体不足
解决方案：尝试不同的抗体浓度/稀释。

原因八：孵育温度过低
解决方案：确保在正确温度下进行孵育。所有试剂（包括孔板）在进行实验前应处于室温，或试剂的实验方案所建议的温度。

原因九：波长不正确
解决方案：确认波长，再次读板。

原因十：孔板被强力洗涤
解决方案：检查并确保自动洗涤系统的压力正确。如果手动洗涤，则轻轻吸取冲洗缓冲液。

原因十一：孔变干
解决方案：测定开始后，不要让孔变干。将所有的孵育步骤使用封口膜或胶带密封孔板。

原因十二：酶反应的显色速度慢
使用前配制底物溶液。确保母液未过期、未污染。延长孵育时间。

变异系数（CV）较大 

原因一：孔中有气泡
解决方案读板前，确保不存在气泡。

原因二：孔洗涤不均/未充分洗涤
解决方案：检查洗板机的所有管口是否畅通。使用推荐方法进行洗涤。

原因三：试剂混匀不充分
解决方案：确保所有试剂充分混匀。

原因四：移液量不一致
解决方案：正确使用经过校准的移液器。

原因五：边缘效应
解决方案：确保孔板和所有试剂处于室温。

原因六：样品制备或保存条件不一致
解决方案：确保样品制备保持一致，使用*的样品保存条件（例如尽可能减少反复冻融）。

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