WB实验避免踩坑

    Western Blot，大名蛋白免疫印迹，小名“西方杂交”。作为定性定量两把好手，毫不夸张地说，WB 可以说是实验室人人必会的技能之一，但并非每人都能做出一张的曝光图，宛若夜深的楼宇灯火阑珊。今天就教给新同学们新手WB避坑指南，避开那些容易出现的问题，让你以后的WB曝光图赏心悦目，小伙伴十人九慕，导师赞不绝口。

    问题一：有些同学的WB图，一大块黑色，找条带全靠猜。
    这种情况原因有三：
    1.封闭不充分
    除了生物素标记的抗体需要使用 0.5%-2% 的 BSA 封闭，建议大部分蛋白用 5% 脱脂奶粉在 4℃ 条件下过夜封闭。

    2.洗膜不*
    需用新配制 1xTBST 快速洗膜，每 5 分钟更换新液，循环 3-4 次。

    3.显色液灵敏度过高
    注意有些灵敏度过高的显色液需要要稀释后使用，否则会影响曝光。

    问题二：白雪皑皑，同学们的心都凉透了，造成这种成像的原因是？
    这种情况原因有三：
    1.阳性对照必须加
定性实验里，如果没有出现你要的条带，你需要一次阳性对照来证明，不是操作或者抗体有问题，是条带真没有。

    2.抗体有无加错
    加抗体之前一定要确认种类，不然你用羊抗猪的抗体去杂鼠抗，当然会杂不出来。

    3.抗体失效
    有这个可能性但较小，*的方法就是使用那些被师兄师姐证明质量过硬的抗体啦。推荐使用使用*、高质量的抗体，记得关注售后服务哦。

    问题三：有时候我们会发现所有的条带都太浅，同预期相差甚远，这种情况要怎么改善呢？
    这种情况原因有二：
    1.显色液过少或者反应时间不足
    显色液的使用方法严格按照说明书要求。

    2.抗体浓度
    虽然抗体都有推荐使用浓度，有时也需要提高浓度才能使条带清晰呈现。

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