山羊痘抗体（Pox-Ab）说明书

山羊痘抗体（ Pox-Ab）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：  96T
2pg/ml-60pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中山羊痘抗体（ Pox-Ab）含量。实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊痘抗体（ Pox-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入山羊痘抗体（ Pox-Ab），再与 HRP标记的抗原结合，形成抗原 -抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的山羊痘抗体（ Pox-Ab）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中山羊山羊痘抗体（ Pox-Ab）浓度。试剂盒组成
1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7 终止液  6ml×1瓶 
2 酶标试剂  6ml×1瓶  8 标准品（ 120pg/ml）  0.5ml×1瓶 
3 酶标包被板  12孔 × 8条  9 标准品稀释液  1.5ml×1瓶 
4 样品稀释液  6ml×1瓶  10 说明书  1份 
5 显色剂 A液  6ml×1瓶  11 封板膜  2张 
6 显色剂 B液  6ml×1/瓶  12 密封袋  1个

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。操作步骤
1. 
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，

然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。

4. 配液：将
30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用

5. 
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6. 
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同
3。

8. 洗涤：操作同
5。

9. 
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色15分钟.

10. 
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 
测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止

60pg/ml  5号标准品  150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液 
30pg/ml  4号标准品  150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液 
15pg/ml  3号标准品  150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液 
7.5pg/ml  2号标准品  150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液 
3.75pg/ml  1号标准品  150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液 

液后 15分钟以内进行。操作程序总结：

计算
以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项
1．
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．
请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．
底物请避光保存。

7．
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8．
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．
本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；
2-8℃。

2．有效期：
6个月