小鼠白三烯C4（LTC4）ELISA的操作说明

1.         标准品的稀释：小鼠白三烯C4（LTC4）ELISA试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240ng/L
 5号标准品
 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
 
120ng/L
 4号标准品
 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
 
60ng/L
 3号标准品
 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
 
30ng/L
 2号标准品
 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
 
15ng/L
 1号标准品
 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
  2.        加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。