鸡减蛋综合征病毒抗体（EDSV Ab）试剂盒说明书

鸡减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

96T

使用目的：

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)表

达。 实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)表达。用纯化的抗

原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)相结合，经洗涤 除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物， 经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较， 从而判定标本中鸡减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)的存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.     编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.    加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.     温育：操作同 3。

8.     洗涤：操作同 5。

9.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.   测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为减蛋综合征病毒抗体(EDSV Ab)阳性

。

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须 注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月

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