细胞转染 实验方法

                      细胞转染 实验方法 

细胞转转染技术以HeLa细胞为例

Day 1: HeLa细胞传代入24孔板3个孔，1ml10％FBS的DMEM培养，密度以使其第2天能生长至70％左右面积为宜。

Day 2:

     1、转染液的配制：

        A液：2×1μl lipofectamine Gibco 滴入 2×50μl无血清培基中，混匀后静置。

                  B液：9.36μl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36μlβ－gal-siRNA (4рmol/μl)分别与50μl无血清培基混匀后静置。

            2、待A液静置5分钟时，取50μlA液分别滴入B液的两组中。混匀，静置15分钟时，开始准备细胞。

       3、弃掉原细胞培养液，用2ml 1×PBS加入培养皿中，前后左右倾斜培养皿，洗细胞一次，尽量吸净PBS。转染混合液中分别补100μl无血清培基混匀，马上滴入洗好的细胞上。静置约2分钟，放入37℃孵箱中。另设细胞阴性对照组，只用无血清培基处理。

       4、转染后4小时，补800ml 15％FBS的DMEM，放入37℃孵箱中。

Day 5:转染后70小时准备侵袭实验。

     步骤见*部分，不同之处在于Matrigel为1mg/ml 30μl。

Day 8:侵袭实验观察12小时后，取出染色。

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