喜贺内蒙古大学对干扰素检测法有了新的突破

据Elisa试剂盒技术报道：

γ-干扰素(IFN-γ)是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。研究表明,内源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细 胞免疫状态,因此对样本中的IFN-γ进行定量分析,在免疫机制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等 方面都具有极其重要的理论价值和应用价值。

近日，内蒙古大学对干扰素检测法有了新的突破。本实验旨在制备鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)单克隆抗体并建立对鸡γ-干扰素的定量ELISA检测方法。 本研究利用在大肠埃希氏菌中原核表达的鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)免疫8周龄BALB/c鼠3次后,按标准程序融合后,以昆虫细胞表达的 rChIFN-γ作为检测抗原,通过间接ELISA和有限稀释法筛选了阳性杂交瘤细胞株,利用阳性的杂交瘤细胞制备腹水单抗并测定其效价,通过Western-blot和单抗中和试验分析了rChIFN-γ与单抗之间的特异性。对单抗IgG进行了HRP,FITC及生物素标记,测定了三种标记单 抗的效价。在测定原核表达rChIFN-γ的浓度和滴定昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒的活性的基础上,建立了鸡γ-干扰素的定量ELISA检测方 法。通过ConA刺激SPF鸡脾淋巴细胞产生了IFN-γ,并利用FITC标记的单抗对其进行了初染。 通过以上试验获得了一株能够稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该株单抗命名为G1株,其腹水效价为1:1×105。Western- blot分析和单抗中和试验表明抗原抗体之间有很好的特异性;对单抗IgG进行HRP,FITC及生物素标记效价分别达到 1:5000,1:100,1:5000。利用纯化的单抗对原核表达rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回归方程为 y=2.2742*x+0.105,回归系数R=0.975,zui低检测浓度为15ng/ml,批内变异系数和批间变异系数均小于10%。利用昆虫细胞表达 rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回归方程为y=0.1164*x-0.1281,回归系数R=0.9539。ICC初染结果为按10μg/ml 的ConA刺激鸡脾淋巴细胞,分泌的鸡IFN-γ的阳性率为1.71%。 结论:本实验制备的抗鸡γ-干扰素单克隆抗体性质稳定,腹水单抗效价高,利用HRP,FITC及生物素标记的单抗IgG的效价均达到有效的使用效价。重组 鸡γ-干扰素对单抗绘制OD值-抗原浓度标准曲线具有良好的线型关系,且二者之间具有较好的特异性、重复性和稳定性。ICC初染试验表明本实验制备的单抗 能够与天然的鸡γ-干扰素发生特异性反应。

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